间充质干细胞 (MSCs) 行动一种具有免疫颐养和分化智力的细胞，在细胞休养界限展现出较大后劲。马MSCs (eMSCs) 在休养马匹的关键损害方面尤其具有上风，举例半月板损害、软骨退化和骨关键炎。干系词，eMSCs的临床利用靠近着生物制造方面的挑战，越过是如何收尾细胞数目的大范畴扩增。传统的静态培养设施无法知足临床利用的需求足球投注app，而生物响应器期间则提供了一种可行的科罚决策。
02 扩增工艺和散伙展示1. 垂直轮生物响应器：eMSCs放大坐蓐的理思系统
PBS生物期间公司斥地的垂直轮式 (VW) 生物响应器，是eMSCs的放大坐蓐的理思系统。垂直轮生物响应器特有的羼杂模式，荟萃了径向和轴向流体流动，灵验地镌汰了剪切应力，同期收尾了遵守更高的羼杂，从而为细胞滋长提供了更好的环境。
2. 料想团队通过三个不同范畴的放大推行，考证了垂直轮生物响应器在eMSCs放大坐蓐中的上风
张开剩余89%图1.eCB-MSCs在垂直轮生物响应器中放大扩增的料想遐想线路图
（A）从0.1升到0.5升垂直轮生物响应器的范畴放大；
（B）径直从静态培养中在3L垂直轮生物响应器中的扩增；
（C）模拟的范畴放大过程，用于细胞休养，包括两次静态传代，随后进行两次生物响应器传代。
2.1 从0.1L到0.5L的放大
这是放大坐蓐的第一步，将eCB-MSCs从0.1L范畴的垂直轮生物响应器转机至0.5L范畴的垂直轮生物响应器。散伙知道，两种范畴的生物响应器在细胞扩增方面取得了同样的成果，证明了垂直轮生物响应器在较小范畴上的可膨胀性。
图2.eCB-MSCs在0.1L垂直轮生物响应器中的扩增，并传代至0.5L垂直轮生物响应器（生物工艺A）
（A）0.1升和0.5升垂直轮生物响应器中细胞附着密度的变化；
（B）0.1升和0.5升垂直轮生物响应器中的得益细胞密度；
（C）不同培养容器中eCB-MSCs在不同天数的滋长图像（绿色荧光为细胞核染色）。
2.2 将静态培养与贪图机罢休的PBS 3L生物响应器进行相比
为了考证3L生物响应器在放大坐蓐中的上风，料想团队将其与静态培养进行了相比。3L生物响应器通过贪图机罢休系统保管了更好的pH、溶氧量和温度，最终细胞密度达到1.5 × 105细胞/cm2，得益了1.5 × 109个细胞，证明了其在放大坐蓐中的上风。
图3.eCB-MSCs在3L垂直轮生物响应器中的扩增，与0.1L垂直轮生物响应器和静态培养的对比（生物工艺B）
垂直轮生物响应器和静态培养的对比
（A）在不同培养容器中细胞附着密度的变化；
（B）3L垂直轮生物响应器中的CO2罢休输入；
（C）3L垂直轮生物响应器中的氧气罢休输入及熔化氧（DO）测量；
（D）不同培养容器中在线和离线pH值测量的变化；
（E）第5天eCB-MSCs在微载体上和静态培养中的滋长图像（绿色荧光为细胞核染色，蓝色为肌动卵白染色）。
2.3 模拟临床历练历程，从静态培养放大到3L贪图机罢休生物响应器
为了更接近果然的临床历练历程，料想团队模拟了从静态培养到3L贪图机罢休生物响应器的放大过程。散伙知道，细胞扩增遵守和细胞质料均保捏结识，进一步考证了垂直轮生物响应器在放大坐蓐中的可行性和结识性。
图4. eCB-MSCs在模拟临床历练生物工艺（生物工艺C）中的扩增
（A）在不同培养容器中细胞附着密度的变化。瑕疵条线路样本间的尺度差；
（B）3L垂直轮生物响应器中的罢休CO2输入及在线pH值；
（C）3L垂直轮生物响应器中的罢休氧气输入及熔化氧（DO）测量；
（D）第5天eCB-MSCs在微载体上和静态培养中的滋长图像（绿色荧光为细胞核染色，蓝色为肌动卵白染色）；
（E）每个下贱处理格局中的得益遵守和细胞亏欠情况。
2.4 扩增的eCB-MSCs功能与表型分析
料想团队对放大坐蓐后的eCB-MSCs进行了功能和表型分析。散伙知道，eCB-MSCs在细胞表型、功能和免疫颐养智力方面均保捏结识，知足临床利用的条目。
图5.在生物工艺B（A–C）和生物工艺C（D–F）中扩增的eCB-MSCs功能和表型
（A）生物工艺B细胞分析的线路图；
（B）体外软骨分化的组织学评估，使用托鲁蓝染色（i–iii）和苏mu.精-伊红染色（iv–vi）（i和iv - 3L生物响应器，ii 和 v- 0.1升生物响应器，iii 和vi-静态培养）；
（C）eCB-MSC象征物和外周血单核细胞（PBMC）分析的流式细胞术散伙，用于生物工艺B；
（D）生物工艺C分析的细胞的线路图；
（E）体外软骨分化的组织学评估，使用托鲁蓝染色（i–iii）和苏mu.精-伊红染色（iv–vi）（i和iv - 3L生物响应器，ii 和 v- 0.5升生物响应器，iii 和vi - 静态培养）；
（F）eCB-MSC象征物和PBMC的流式细胞术分析，阳性对照为用ConA处理的淋巴细胞，阴性对照为未用ConA处理的淋巴细胞。
2.5 细胞静态复原推行
为了评估3L垂直轮生物响应器中得益的eCB-MSCs的增殖后劲，料想团队进行了细胞静态复原推行。散伙知道，3L垂直轮生物响应器中得益的eCB-MSCs具有更高的增殖后劲。
图6.从3L垂直轮生物响应器中得益的eCB-MSC的静态复原与生物工艺C中的静态培养特别
（A）推行配置的线路图；
（B）接种1天后细胞附着在T形瓶中的分析；
（C）得益的细胞在培养6天后的倍增情况，相比了从3L垂直轮生物响应器和静态T形瓶中得益的细胞；
（D）接种1天和6天后，从3L垂直轮生物响应器或静态T形瓶中传代的细胞图像。
2.6 表面细胞产量
表面细胞产量贪图部分：基于Bioprocess C的表面细胞产量贪图，通过垂直轮生物响应器进行放大坐蓐，按照肇始细胞量接种7.5e5个细胞，经4代放大培养，可得益约760亿个细胞高质料eCB-MSCs，知足临床利用的需求。
图7.使用在模拟临床历练范畴扩增生物工艺（生物工艺C）中每次传代得回的得益细胞数，贪图的表面细胞产量，以及每次传代所需的相应体积
03 往常瞻望往常料想不错进一步优化下贱处理格局，普及细胞得益遵守。此外，还需要进行更多的料想，以阐述垂直轮生物响应器放大坐蓐的eCB-MSCs在体内也具有同样的免疫颐养和分化智力。
04 纪念PBS垂直轮生物响应器为eMSCs的放大坐蓐提供了理思的平台，为eMSCs的临床利用带来了新的但愿。这项料想为eMSCs生物制造界限的发张开辟了新的说念路，为马匹和其他动物的健康带来了福音。
垂直轮生物响应器的上风 可膨胀性：垂直轮生物响应器特有的羼杂模式使其粗略在不同范畴上保捏同样的流体能源学特质，从而收尾细胞扩增遵守的结识。 罢休性：贪图机罢休系统不错精准罢休pH、溶氧量和温度等关键参数，确保细胞在更好的环境中滋长。 遵守高：垂直轮生物响应器的遵守更高的羼杂和细胞附着特质，不错更猛进度普及细胞扩增遵守和得益率。 遵守高的低剪切力悬浮体系：基于微载体培养的细胞得到要素悬浮培养，细胞质料精致。放大坐蓐后的eCB-MSCs在细胞表型、功能和免疫颐养智力方面均保捏结识，知足临床利用的条目。曼博生物行动PBS国内代理商，若您对垂直轮生物响应器感意思，接待征询，咱们将赤诚为您奇迹！
缓和曼博生物公众号：Mine-Bio足球投注app，稽查更多期间著作！
发布于：上海市